HCT-15/5FU 人結(jié)直腸癌氟尿嘧啶耐藥株
Fluorouracil resistant strains of human colorectal cancer ,HCT15/5FU
貨號：YJ-h073（STR（HCT15）鑒定）
價格： 2500.0
規(guī)格： 1*106
細(xì)胞介紹
HCT-15/FU為由HCT-15細(xì)胞構(gòu)建的耐5-FU藥物細(xì)胞株。
細(xì)胞特性
1）來源：人結(jié)腸癌細(xì)胞耐藥篩選 | 2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長 |
3）含量：>1×10^6 細(xì)胞數(shù) | 4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝 |
5）用途：僅供科研使用。 |
細(xì)胞運輸、保存及注意事項
復(fù)蘇細(xì)胞 | 凍存細(xì)胞 | |
包裝 | 充液的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 1mL凍存管 |
運輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱 | -80℃冰箱中保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮 或立即復(fù)蘇 |
※注意事項 | 1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞有污染；或凍存管有破損，融化、漏液等，請立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀，顯微鏡下細(xì)胞照片（100倍，200倍各2張）； 2. 若收到的復(fù)蘇細(xì)胞有少量細(xì)胞脫落、飄起，可能由于運輸途中導(dǎo)致。請先于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置2~3h后，再進行處理； 3. 復(fù)蘇細(xì)胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基，血清濃度較低，收到細(xì)胞后請及時更換為完全培養(yǎng)基； 4. 建議收到細(xì)胞后，首先進行擴增（至少3代），并凍存部分細(xì)胞以備用。 5. 初次培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞匯合度達約80%時，可加入10~16ug/mL 5-FU的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞完全融合后傳代。細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至20ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細(xì)胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞匯合度達80%左右，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的5-FU藥物濃度。 6. 細(xì)胞凍存過程中，不可添加藥物，且凍存液中不含藥物。 | |
細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制
1）5-FU藥物的配制及保存
建議將5-FU藥物配制成20mg/mL的母液，即使用1mL 1M的NaOH溶液溶解20mg 5-FU藥物，使其完全溶解。（若所購買的5-FU藥物規(guī)格為10mg，則加入0.5mL 1M的NaOH溶液，待其完全溶解即為20mg/mL母液）
注意：可根據(jù)用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的5-FU，4℃保存1周，-20℃保存1個月，-80℃保存6個月。
2）凍存液的配制
90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。（凍存液中不含藥物）
3）完全培養(yǎng)基的配制（推薦使用YJ-h073-001b）
成分 | 體積/濃度 |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% |
雙抗 | 1% |
20ug/mL 5-FU | 0.1%母液（20mg/mL） |
RPMI-1640培養(yǎng)基 | 補充至所需體積 |
細(xì)胞培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。
細(xì)胞處理
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
注意：①細(xì)胞復(fù)蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細(xì)胞生長至匯合度達80%左右時，方可添加10~16ug/mL 5-FU藥物；若細(xì)胞生長狀態(tài)較為緩慢，可適當(dāng)降低5-FU的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含5-FU的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的5-FU濃度。
②建議復(fù)蘇細(xì)胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸，造成人員傷害。
2）細(xì)胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）
①待細(xì)胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)。
②棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1次，吸凈殘余的PBS。
③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細(xì)胞細(xì)胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養(yǎng)瓶至細(xì)胞全部脫落。迅速拿回操作臺，加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。
④將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。
⑤向細(xì)胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕吹混勻。將細(xì)胞懸液按1：1的比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基。
注意：細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至20ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細(xì)胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞匯合度約80%，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的5-FU藥物濃度。
3）細(xì)胞凍存
①細(xì)胞凍存時，步驟同2）細(xì)胞傳代的①~④，細(xì)胞計數(shù)后，加入配制好的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，按照1×10^6 ~ 1×107個細(xì)胞/mL分配到一個凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
注意：細(xì)胞凍存過程中，不可添加藥物。
②將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作伙伴!
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